聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的電泳方法。在這種支持介質上可根據被分離物質分子大小和分子電荷多少來分離。
聚丙烯酰胺凝膠有以下優點:
①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N,N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有格子是帶有酰胺側鏈的碳-碳聚合物,沒有或很少帶有離子的側基,因而電滲作用比較小,不易和樣品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質,在聚合前可調節單體的濃度比,形成不同程度交鏈結構,其空隙度可在一個較廣的范圍內變化,可以根據要分離物質分子的大小,選擇合適的凝膠成分,使之既有適宜的空隙度,又有比較好的機械性質。一般說來,含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠,機械性能適用于分離分子量范圍不1萬至100萬物質,1萬以下的蛋白質則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠,而分子量特別大的可采用含丙烯酰胺4%的凝膠,大孔膠易碎,小孔膠則難從管中取出,因此當丙烯酰胺的濃度增 加時可以減少雙含丙烯酰胺,以改進凝膠的機械性能。
③在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對熱穩定。凝膠無色透明,易觀察,可用檢測儀直接測定。
④丙烯酰胺是比較純的化合物,可以精制,減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體,甲撐雙丙烯酰胺稱交聯劑,在水溶液中,單體和交聯劑通過自由基引發的聚合反應形成凝 膠。
在聚丙烯酰胺凝膠形成的反應過程中,需要有催化劑參加,催化劑包括引發劑和另速劑兩部分。引發劑在凝膠形成中提供始自由基,通過自由基的傳遞,使丙烯酰胺成為自由基,發動聚合反應,加速劑則可加快引發劑放自由基的速度。
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